Staphylococcus hemolyticus este o bacterie gram-pozitivă coagulază-negativă, care este foarte frecventă în spitale. În ultimii ani, a existat o îngrijorare din ce în ce mai mare din cauza riscului ridicat de infecții dobândite în spital. Staphylococcus hemolyticus poate provoca în continuare infecții ale pielii, meningită, peritonită și chiar sepsis. Întârzierile în diagnosticul clinic pot duce la deteriorarea afecțiunilor de sănătate, astfel încât diagnosticul rapid al Staphylococcus hemolyticus este esențial pentru tratamentul precis.
Grupul de cercetare al profesorului Ji Tuo de la Departamentul Laboratorului Central al Spitalului Popular al Lianangangului Second a publicat un articol „O detectare rapidă și vizuală a Staphylococcus hemolyticus în epruvete clinice cu Mira-LF-uri„ în revista „Analytica chimica Acta”, cu un factor de impact de 6,2.
Prezentare generală a studiului
În acest studiu, grupul prof. Ji Tuo a stabilit o metodă pentru detectarea Staphylolyticus hemolyticus de către Mira-LFS bazată pe gena MVAA și a utilizat tehnologia de amplificare a acidului nucleic rapid de temperatură multi-enzime, combinată cu bandă de testare a fluxului lateral pentru a obține o detectare rapidă a patogenului. Experimentul a fost efectuat la 37 de grade, iar rezultatele au fost detectate în 9 min cu o sensibilitate de detectare a 0. 147 CFU/reacție. Metoda de detectare a Mira-LFS este potrivită pentru detectarea cu punct fix al Staphylococcus hemolyticus în probe clinice și realizează metoda de identificare a Staphylococcus hemolyticus prin POCT, care este de o valoare deosebită pentru diagnosticul rapid și tratamentul bolilor în zonele neservite. Grupul de cercetare a utilizat Mira-LFS, qPCR și metode tradiționale de cultură bacteriană pentru a analiza 95 de probe clinice aleatorii și a confirmat aplicabilitatea clinică.
Metode de cercetare
Mai sus este prezentată o diagramă schematică a testului Mira-LFS. În acest studiu, s -au utilizat kitul de amplificare rapidă a temperaturii constante a ADN -ului AMPFuture Biotech (tipul de testare a aurului coloidal) și banda de testare a detectării acidului nucleic.
Lungimea primerului genei MVAA a fost 30-35 nucleotide, iar lungimea produsului de amplificare a fost 100-350 bp și au fost proiectate un total de 6 perechi de primeri candidați. GDN -ul tulpinilor standard de stafilococ stafilolitic a fost utilizat pentru analiza MIRA, primerii candidați au fost examinați, iar produsele amplificate au fost vizualizate cu 2% electroforeză cu gel de agaroză.
(Produsele de amplificare sunt afișate folosind electroforeza cu gel de agaroză)
Sonda este apoi proiectată în funcție de secvența de primer înainte (16 CP înapoi). Capătul 5 'al sondei este etichetat cu FITC, iar capătul 3' este etichetat C3. Nucleotida de poziție 31- în sondă este înlocuită cu THF la o distanță de 30 bp față de capătul 5 'și 15 bp de la capătul 3'. Capătul de 5 'al primerului invers selectat este etichetat cu biotină.
.
În plus, au fost optimizate condițiile de reacție pentru detectarea mira-LF-urilor de către Staphylococcus hemolyticus. Testele sunt efectuate la 37 de grade de la 4-12 Min la intervale de 2 min. Rezultatele sunt prezentate în timpul de reacție de 8 minute, iar linia de testare este clar vizibilă. În plus, testul este efectuat de la gradul 22-52 la intervale de 5 grade. Gradul 37-42 este temperatura cea mai potrivită pentru detectarea Mira-LFS. Prin urmare, timpul și temperatura optimă de reacție a metodei Mira-LFS pentru Staphylococcus hemolyticus au fost de 8 min și, respectiv, 37 de grade. Împreună cu faptul că rezultatul final este vizualizat de LFS în 1 min, timpul total de detectare este de 9 min.
(Optimizarea timpului de reacție și a temperaturii)
Rezultate experimentale
1. Verificarea sensibilității
Diferite concentrații de ADN genomic (gDNA) obținute din diluții seriale ale culturilor Staphylococcus hemolytica (1 0^6-10^0 cfu/ml) au fost testate pentru mira-LFS.
(Semnal pozitiv la diferite concentrații)
Analiza de regresie a unității probabilistice a arătat că LOD 95% determinat de testul Mira-LFS a fost 0. 147CFU/reacție.
(Limita calculului detectării)
2. Validarea specificității
Selectivitatea detectării Mira-LFS a fost determinată prin analizarea a 18 tulpini de microorganisme patogene comune și 15 tulpini de Staphylococcus hemolyticus clinic. Rezultatele au arătat că testul Mira-LFS a fost negativ pentru toate celelalte 18 bacterii patogene și pozitiv pentru 15 probe clinice verificate de Staphylococcus hemolyticus.
(8 tulpini de bacterii patogene standard și 15 tulpini de streptococ hemolitic clinic au fost testate, respectiv)
Testul Mira-LFS are o selectivitate ridicată și este potrivit pentru screeningul Staphylococcus hemolyticus.
3. Testarea eșantionului efectiv
Un total de 95 de probe au fost colectate aleatoriu de la Spitalul de Populare al Secondului Libanungan, inclusiv 35 de probe de piele și țesut moale, 16 probe de urină, 14 probe de spută și 30 de probe de sânge.
(95 de exemplare clinice au fost testate prin diferite metode)
Rezultatele au arătat că metoda de detectare a fost 100% în concordanță cu metoda qPCR. În plus, în comparație cu standardul de aur (GB/T4789. 11-2003), sensibilitatea și specificitatea testului Mira-LFS pentru identificarea infecției cu Staphylococcus hemolytica au fost 100% și, respectiv, 98,73%. Aceste rezultate validează în continuare fezabilitatea tehnică a metodei în detectarea Staphylococcus hemolyticus în probele clinice.
Metoda Mira-LFS este utilizată pentru detectarea rapidă a Staphylococcus hemolyticus de către POCT, care este eficient, precis, simplu și rentabil, ceea ce este util pentru deciziile rapide de diagnostic și tratament.