Staphylococcus hemolyticus este o bacterie gram-pozitivă coagulază-negativă, care este foarte frecventă în spitale. În ultimii ani, infecțiile dobândite în spital au primit o atenție din ce în ce mai mare din cauza riscului lor mai mare. Staphylococcus hemolyticus poate provoca în continuare infecții ale pielii, meningită, peritonită și chiar sepsis. Întârzierile în diagnosticul clinic pot duce la agravarea stării de sănătate, astfel încât diagnosticul rapid al S. hemolyticus este esențial pentru tratamentul precis.
Echipa de cercetare a profesorului Ji Tuo de la Departamentul de Laborator Central al Spitalului de la Lianangang, China, a publicat un articol „o detectare rapidă și vizuală a Staphylococcus hemolyticus în epruvete clinice cu Mira-LFS„ în jurnalul „Analytica Chimica Acta”, cu un factor de impact de 6,2.
1. Prezentare generală a cercetării
În acest studiu, a fost stabilită o metodă Mira-LFS bazată pe gena MVAA pentru a detecta Staphylococcus hemolyticus. Tehnologia de amplificare rapidă a acidului nucleic izoterm multi-enzimă Mira a fost combinată cu banda de testare a fluxului lateral LFS pentru a obține o detectare rapidă a agentului patogen.
Experimentul a fost realizat la 37 de grade, iar rezultatele au putut fi detectate în 9 minute. Sensibilitatea de detectare a fost 0. 147cfu/reacție.
Metoda de detectare a Mira-LFS este potrivită pentru detectarea cu punct fix al hemoliticului Staphylococcus în probele clinice, realizând metoda POCT pentru identificarea Staphylococcus hemolyticus, care este de mare valoare pentru diagnosticul rapid și tratamentul bolii în zonele cu servicii medicale subservate.
Echipa de cercetare a utilizat Mira-LFS, qPCR și metode tradiționale de cultură bacteriană pentru a analiza 95 de probe clinice aleatorii și a confirmat aplicabilitatea clinică.
2. Metode de cercetare
Schema schematică a detectării Mira-LFS este prezentată mai sus.
Cercetarea a utilizat AMP-Future Biotech Biotech Kit de amplificare rapidă de amplificare rapidă (tipul de test de aur coloidal) și benzi de testare de detectare a acidului nucleic.
Lungimea primerului genei MVAA este 30-35 nucleotide, iar lungimea produsului de amplificare este 100-350 bp. Au fost proiectate un total de 6 perechi de primeri candidați. Analiza Mira a fost efectuată folosind GDNA de tulpini standard de stafilococ hemolyticus, primerii candidați au fost examinați și produsele de amplificare au fost afișate folosind 2% electroforeză cu gel de agaroză.
Apoi proiectați sonda pe baza secvenței de primer înainte (extinzând 16 CP înapoi). Capătul de 5 'al sondei a fost etichetat cu FITC, iar capătul 3' a fost etichetat cu blocarea C3. Folosiți THF pentru a înlocui 31 de nucleotide din sondă. THF este la 30 CP de la capătul 5 'și 15 CP de la capătul 3'. Capătul de 5 'al primerului invers selectat este etichetat cu biotină.
Mai mult, echipa de cercetare a optimizat condițiile de reacție pentru detectarea Mira-LFS a Staphylococcus hemolyticus. Testați la 37 de grade la intervale de 2 minute de la 4 la 12 minute. Rezultatele sunt afișate la 8 min timp de reacție și linia de testare este clar vizibilă. În plus, testele sunt efectuate la intervale de 5 grade de la gradul 22-52. Gradul 37-42 este cea mai potrivită temperatură pentru detectarea Mira-LFS. Prin urmare, timpul și temperatura optimă de reacție a metodei Mira-LFS pentru Staphylococcus hemolyticus sunt de 8 min și, respectiv, 37 de grade. Împreună cu rezultatul final vizualizat de LFS în 1 minut, timpul total de detectare este de 9 minute.
3. Rezultate experimentale
Verificarea sensibilității
Testul Mira-LFS a fost efectuat pe diferite concentrații de ADN genomic (gDNA) obținute din culturi staphylococcus hemolyticus diluate în serie (1 0^6-10^0 cfu/ml).
Analiza de regresie a unității probabilistice a arătat că LOD 95% determinat de testul Mira-LFS a fost 0. 147 CFU/reacție.
Verificarea specificității
Analizând 18 tulpini microbiene patogene comune și 15 tulpini clinice Staphylococcus hemolyticus, a fost determinată selectivitatea detectării Mira-LFS a Staphylococcus hemolyticus. Rezultatele au arătat că testul Mira-LFS a fost negativ pentru alte 18 bacterii patogene și pozitiv pentru 15 probe clinice verificate de Staphylococcus hemolyticus.
Detectarea Mira-LFS este extrem de selectivă și potrivită pentru screeningul Staphylococcus hemolyticus.
Testarea eșantionului propriu -zis
Spitalul de oameni din Second Second a colectat la întâmplare 95 de exemplare, inclusiv 35 de probe de piele și țesut moale, 16 probe de urină, 14 probe de spută și 30 de probe de sânge.
Rezultatele au arătat că metoda de detectare a fost 100% în concordanță cu metoda qPCR. În plus, în comparație cu standardul de aur (GB/T4789. 11-2003), sensibilitatea și specificitatea metodei de detectare a Mira-LFS pentru identificarea infecției cu stafilococ hemolitticus au fost 100% și, respectiv, 98,73%. Aceste rezultate au verificat în continuare fezabilitatea tehnică a acestei metode în detectarea Staphylococcus hemolitticus în probele clinice.
Metoda Mira-LFS este utilizată pentru detectarea rapidă a POCT a Staphylococcus hemolyticus. Este eficient, precis, simplu și low-cost și ajută la luarea de diagnostic rapid și decizii de tratament.
Aflați despre tehnologia Mira
Tehnologia de amplificare rapidă a acidului rapid de acid nucleic de la AMP-Future amplifică acizii nucleici la o temperatură constantă de 39 de grade -42, cu un timp de reacție de doar 5-20 minute. În plus, nu sunt necesare condiții stricte de laborator, iar scenariile de aplicare sunt diversificate: departamentele de laborator de spital general, îngrijirea primară, testarea la domiciliu, câmpurile etc.
Formele de produs reactiv sunt diverse: pulbere uscată prin congelare, microsfere uscate prin congelare, etc.; Rezultatele afișajului sunt diverse: electroforeza cu gel, curba fluorescenței, benzile de testare a aurului coloidal, etc. Reactivul are performanțe stabile, este ușor de funcționat și este convenabil pentru depozitare și transport.
Cu Mira ca tehnologie de bază a platformei, a dezvoltat o serie de produse de susținere, cum ar fi „tehnologia de eliberare a acidului nucleic ultra-rapid”, „detectorul de fluorescență izotermă izotermă duală”, „sistem integrat automat de detectare închisă”, „dispozitiv de detectare a acidului nucleic automat”, etc. Creează o soluție generală pentru detectarea rapidă a molecularului.